„Kaip visi žinome, PGR yra pagrindinis eksperimentinis metodas biocheminėse laboratorijose. Eksperimento rezultatai visada nepatenkinami, o tai gali būti dėl nedidelio PGR plastikinių eksploatacinių medžiagų užteršimo arba dėl eksperimentinių trukdžių, kuriuos sukelia inhibitorių įvedimas. Yra dar viena labai svarbi priežastis: netinkamas eksploatacinių medžiagų pasirinkimas taip pat turės didelę įtaką eksperimento rezultatams.
Yra daug priežasčių, turinčių įtakos PGR eksperimentų rezultatams: paprastai yra šios 7 rūšys.
1. Pradmenys: Pradmenys yra raktas į specifinę PGR reakciją, o PGR produktų specifiškumas priklauso nuo pradmenų ir šabloninės DNR komplementarumo laipsnio;
2. Fermentas ir jo koncentracija;
3. dNTP kokybė ir koncentracija;
4. Šablono (taikinio geno) nukleorūgštis;
5. Mg2+ koncentracija;
6. Temperatūros ir laiko nustatymas;
7. Ciklų skaičius;
8. Įranga, eksploatacinės medžiagos ir kt.
Tarp daugelio įtakojančių veiksnių vartojimo reikmenys yra vienas iš labai svarbių ir lengvai nepastebimų veiksnių.
Yra daug rūšių
PGR vartojimo reikmenys: 8 mėgintuvėliai, mažo tūrio mėgintuvėliai, standartiniai vamzdeliai, be sijonų, pusiau su sijonais, su pilna sienele ir PGR bei qPCR plokštelių serija. Labai sunku pasirinkti ir yra daug bendrų problemų, pažvelkime į problemas, kurias pasirenka kiekvienas
PGR vartojimo reikmenys, ir kaip jas išspręsti?
Kodėl
PGR vartojimo reikmenyspaprastai pagamintas iš PP?
Atsakymas: PCR/qPCR eksploatacinės medžiagos dažniausiai gaminamos iš polipropileno (PP), nes tai yra biologiškai inertiška medžiaga, paviršius nelengvai prilimpa prie biomolekulių, turi gerą cheminį atsparumą ir temperatūros toleranciją (gali būti autoklavuojamas 121 laipsnio temperatūroje) bakterijoms. taip pat gali atlaikyti temperatūros pokyčius terminio ciklo metu). Šios medžiagos dažniausiai tiesiogiai liečiasi su reagentais ar mėginiais, todėl gamybos ir paruošimo procese reikia pasirinkti kokybiškas medžiagas ir gerą apdorojimo metodą.