ELISA rinkinys pagrįstas kieta antigeno arba antikūno faze ir antigeno arba antikūno žymėjimu fermentais. Antigenas arba antikūnas, prijungtas prie kietojo nešiklio paviršiaus, vis dar išlaiko savo imunologinį aktyvumą, o fermentu pažymėtas antigenas arba antikūnas išlaiko ir imunologinį, ir fermentinį aktyvumą. Nustatymo metu tiriamas mėginys (kuriame matuojamas antikūnas arba antigenas) reaguoja su antigenu arba antikūnu ant kietojo nešiklio paviršiaus. Ant kieto nešiklio susidaręs antigeno-antikūno kompleksas atskiriamas nuo kitų skystyje esančių medžiagų plaunant.
Pridedama fermentu žymėtų antigenų arba antikūnų, kurie reakcijos būdu taip pat prisijungia prie kietojo nešiklio. Šiuo metu fermento kiekis kietoje fazėje yra proporcingas medžiagos kiekiui mėginyje. Pridėjus fermento reakcijos substratą, fermentas katalizuoja substratą, kad jis taptų spalvotais produktais. Produkto kiekis yra tiesiogiai susijęs su tiriamos medžiagos kiekiu bandinyje, todėl galima atlikti kokybinę arba kiekybinę analizę pagal spalvos gylį.
Didelis fermentų katalizinis efektyvumas netiesiogiai sustiprina imuninio atsako rezultatus, todėl tyrimas yra labai jautrus. ELISA gali būti naudojamas antigenams nustatyti, bet taip pat gali būti naudojamas antikūnams nustatyti.
Pagrindiniai ELISA rinkinio principai
Jis naudoja specifinę antigeno ir antikūno reakciją, kad sujungtų objektą su fermentu, o tada sukuria spalvos reakciją tarp fermento ir substrato kiekybiniam nustatymui. Matavimo objektas gali būti antikūnas arba antigenas.
Taikant šį nustatymo metodą reikalingi trys reagentai:
â Kietosios fazės antigenas arba antikūnas (imuninis adsorbentas)
¡ Fermentu pažymėtas antigenas arba antikūnas (žymeklis)
⢠fermentų veikimo substratas (spalvos kūrimo agentas)
Atliekant matavimą, antigenas (antikūnas) pirmiausia sujungiamas su kietuoju nešikliu, bet vis tiek išlaiko savo imuninį aktyvumą, o tada pridedamas antikūno (antigeno) ir fermento konjugatas (žymeklis), kuris vis dar išlaiko pradinį imuninį aktyvumą ir fermentą. veikla. Kai konjugatas reaguoja su antigenu (antikūnu) ant kieto nešiklio, pridedamas atitinkamas fermento substratas. Tai yra katalizinė hidrolizė arba REDOX reakcija ir spalva.
Jo sukuriamas spalvos atspalvis yra proporcingas išmatuojamo antigeno (antikūno) kiekiui. Šį spalvotą gaminį galima stebėti plika akimi, optiniu mikroskopu, elektroniniu mikroskopu, taip pat gali būti matuojamas spektrofotometru (fermentinės etiketės prietaisas). Metodas paprastas, patogus, greitas ir konkretus.